產(chǎn)品英文名稱：Pichia pastoris HCP ELISA kit
產(chǎn)品中文名稱：畢赤酵母宿主細胞蛋白免疫檢測試劑盒

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Pichia pastoris HCP ELISA kit 產(chǎn)品介紹：
Pichia pastoris畢赤酵母基因表達系統(tǒng)經(jīng)過十多年發(fā)展，成為較完善的外源基因酵母表達系統(tǒng)，具有易于高密度酵母發(fā)酵，欲表達基因可以穩(wěn)定整合在宿主酵母基 因組中，能使產(chǎn)物有效分泌并適當(dāng)糖基化，培養(yǎng)方便經(jīng)濟等特點。Pichia pastoris畢赤酵母基因表達系統(tǒng)利用強效可調(diào)控啟動子AOX1，已高效表達了HBsAg、TNF、EGF、破傷風(fēng)毒素C片段、基因工程抗體等多種外 源基因，證實Pichia pastoris畢赤酵母表達系統(tǒng)為高效、實用、簡便 ，以提高表達量并保持產(chǎn)物生物學(xué)活性為突出特征的外源基因表達系統(tǒng)，而且非常適宜擴大為工業(yè)規(guī)模Pichia pastoris畢赤酵母發(fā)酵。

Pichia pastoris HCP ELISA試劑盒用于檢測在畢赤酵母表達系統(tǒng)中重組表達的產(chǎn)物宿主細胞蛋白污染。zui低檢測濃度<0.3ng/mL。

§檢測原理：Pichia pastoris HCPs檢測是一個雙位點酶聯(lián)免疫檢測。樣本中包含的Pichia pastoris HCPs蛋白與標記有抗- Pichia pastoris抗體的辣根過氧化物酶同時反應(yīng)，反應(yīng)發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗- Pichia pastoris蛋白抗體的微量滴定板中進行。免疫反構(gòu)成為夾層式結(jié)構(gòu)：固相抗休-HCP-酶標記抗體。反應(yīng)結(jié)束后清洗微量滴定板去除未結(jié)合反應(yīng)物。添加 TMB作用底物反應(yīng)。微量滴定板讀數(shù)器上測定水解物濃度，水解物濃度與Pichia pastoris HCPs蛋白濃度成比例。用提供的標準液繪制標準曲線，根據(jù)讀數(shù)可以計算出Pichia pastoris HCPs蛋白含量。

§檢測過程：標準檢測：取出所有試劑平衡到室溫→分別移取25µl標準液，對照物和樣品至待測孔→移取100µl anti- Pichia pastoris:HRP(#F141)至每孔→密封滴定板，搖床室溫溫育3小時（快速檢測時溫育1小時），180rpm→清空小孔，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µl TMB 作用物(#F005)→室溫靜置30分鐘，不需搖床→加100µl反應(yīng)終止液(#F006)→分光光度計450/650nm讀數(shù)

§結(jié)果分析：標準液(0, 1, 4, 20, 75, 250ng/mL)可用于制作標準曲線，標準液濃度相當(dāng)于免疫反應(yīng)HCP總濃度。根據(jù)測定的小孔中標準液吸光值繪制標準曲線。數(shù)據(jù)分析可以使用計算機選配曲線，例如點到點，三次樣本函數(shù)，或四參數(shù)邏輯曲線。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖，Y軸標注吸光值，X軸標注濃度。然后根據(jù)樣品吸光值計算出樣品中HCP濃度。（操作時每一濃度標準液都要重復(fù)滴定到兩個小孔中，以便計算平均分光光度值，樣品也需計算平均吸光值）。

Pichia pastoris HCP ELISA kit產(chǎn)品組份：
● Anti- Pichia pastoris:HRP(辣根過氧化物酶標記)　         1x12mL   F141(Product#)
● Anti- Pichia pastoris coated微量滴定板　                      12x8孔　  F142
● Pichia pastoris HCP標準液(0, 1, 4, 20, 75, 250ng/mL)   1mL/瓶　 F143
● Stop Solution終止液(0.5M硫磺酸)  　　　                     1x12mL　 F006
● TMB (3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯氨)　                                     1x12mL　 F005
● Wash Concentrate清洗物(20倍濃縮)　                           1x50mL   F004

訂購信息：
F550　Cygnus CHO HCP ELISA Kit　       96T/盒
F410　Cygnus E.coli HCP ELISA Kit　      96T/盒
F500　Cygnus Vero Cell HCP ELISA Kit　96T/盒
F140　Cygnus Pichia pastoris ELISA Kit　96T/盒

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