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干細胞搜網(wǎng)實驗室人員教您如何做好 上皮細胞培養(yǎng)：

1）表皮細胞培養(yǎng)
1．取材：取外科植皮或手術殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮膚更好，切成0.5～1平方厘米小塊。
2．EDTA處理：先置入0.02％EDTA中室溫置5分鐘。
3．冷消化：換入0.25％胰蛋白酶中，置4℃過通宵。
4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮與層分開。
5．溫消化：取出表皮單獨處理，用剪刀剪成更小的塊后，置入新的0.25％胰蛋白酶中，37℃再消化30～60分鐘。
6．用吸管輕輕反復吹打，使成細胞懸液。
7．培養(yǎng)液：通過80目不銹鋼紗網(wǎng)濾過后，低速離心，吸上清，直接加入Eagle液和20％小牛血清，制成細胞懸液，接種入碟皿中，CO2溫箱培養(yǎng)。

2） 乳腺組織培養(yǎng)
直接培養(yǎng)法：（適于培養(yǎng)含纖維少的軟組織）
1．在含有少量培養(yǎng)液或Hanks液的容器中，用鋒利刀片將組織反復切割成碎塊。
2．把組織碎塊連同液體注入離心管中，再補加少許培養(yǎng)液，用吸管吹打片刻，置試管架3～5分鐘。吸除上層液可排除非乳腺細胞部分。重復2～3次。
3．末次處理結束后，向沉降管中再補加培養(yǎng)液，用吸管稍吹打，使沉降物重懸。不待細胞團塊下降立即通過3～4層無菌紗布濾入另管中。
4．調(diào)整好適宜密度，接種入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

膠原酶消化法：（適于處理含纖維多的較硬組織）
其過程與培養(yǎng)其它組織相同。

3） 胃上皮細胞培養(yǎng)
1．取材：取胃潰瘍或胃癌手術切除胃標本遠端非病變區(qū)粘膜少許。
2．清洗：用含慶大霉素（400微克/毫升）和二性霉素（2微克/毫升的Hanks）液漂洗后，用鈍器剝離下粘膜，剪成1mm3大小。
3．消化：在I型膠原酶和透明質(zhì)酸酶中，于37℃中消化80分鐘。
4．離心：收集細胞懸液，800轉(zhuǎn)/分離心后，Hanks液漂洗兩次。
5．接種：末次離心后加入含有1％～2％胎牛血清的*培養(yǎng)基，接種入不同孔數(shù)的培養(yǎng)板中，接種量依不同實驗目的而定。

4） 肝細胞培養(yǎng)
初代組織塊培養(yǎng)：
取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝臟剪成1mm3左右的小塊，采用帖壁培養(yǎng)法。

初代消化法培養(yǎng)：
1．把肝組織切成2～4立方毫米的小塊，用不含鈣鎂的BSS液洗兩次。
2．移入1：1的0.1％胰蛋白酶和0.1％膠原酶（都用無鈣鎂BSS配置）中，4℃冷消化10～12小時后，通過250微米和64微米尼龍網(wǎng)或不銹鋼紗網(wǎng)濾過。
3．收集細胞、BSS液洗1～2次、計數(shù)、接種培養(yǎng)。
消化培養(yǎng)肝細胞的另一種方法是灌流法；肝臟灌流需用全肝，以較小動物如小鼠和大鼠為好。
1．無菌解剖動物，取出肝臟，先用BSS洗除血污。
2．取5ml注射器一支，吸取消化液后，把注射器頭輕輕插入肝管中，用線繩結扎牢固，以防消化液漏出，輕輕把消化液注入肝管系統(tǒng)，并不時輕揉壓肝臟，以便消化液進入肝小葉中；消化液在肝內(nèi)停留20～30分后，在吸出消化液的同時并輕揉壓肝臟，以使肝細胞脫落和消化液吸出。
3．待吸凈消化液后，注入離心管中，低速離心分離，用RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)（較其它培養(yǎng)基為好），能獲得較純的肝上皮細胞和獲較好的效果。